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鲁道夫折光法/密度计法测定人血白蛋白含量

2025-02-10

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人血白蛋白是由乙型肝炎疫苗免疫的健康人血浆,经低温乙醇蛋白分离法提取,并经病毒灭活后制成。用于治疗因失血、创伤和烧伤引起的休克,脑水肿及大脑损伤所致的脑压增高,防治低蛋白血症及肝硬化或肾病引起的水肿或腹水。蛋白质含量是人血白蛋白质量评价的重要指标。


常规的白蛋白含量的测定方法是:血细胞分析仪,双缩脲比色法,凯氏定氮,紫外光吸收法等方法。其均需加 入试剂,增加反应时间,实验步骤繁多,费时复杂。本方法是根据不同介质的折射率不同的物理特性,通过折射率读数,计算出蛋白含量。


2010 版中国药典第三部明确将折光法运用于单份血浆中蛋白质含量的测定。


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样品和标准品

标准品名称:人血白蛋白20%浓度;

客户样品:浓度为12%的人血白蛋白溶液。


折光法仪器和附件

• 美国鲁道夫公司 ( Rudolph Research Analytical ) J-457 折光仪

• 纯化水

• 无水乙醇

测量过程

1. 开机,调用方法:Refractive Index;

2. 用纯化水 ( 20 ℃ ) 进行校验,校验通过;

3. 配置标准曲线:

① 人血白蛋白:取浓度为10g/50mL (20%)的标准品,用纯化水分别稀释成浓度为1%、5%、10%、15% 的样品;

4. 取一小滴样品,直接放置在棱镜上,设置温度为20℃,等待温度稳定后,按start 键进行测量;

5. 测量结束后,将样品擦除,并用纯化水和无水乙醇分别进行清洗棱镜。


测量结果

1. 零点检测


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2. 标准样品测量结果

① 人血白蛋白J-457标准曲线


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② 将人血白蛋白的标准曲线用“用户自定义公式”编辑功能,保存至仪器内


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J457人血白蛋白标曲方法


③ 常规人血白蛋白样品检测的结果


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J457人血白蛋白方法样品测试结果


④ 密度计法检测人血白蛋白


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⑤ 将人血白蛋白的标准曲线用“用户自定义公式”编辑功能,保存至仪器内


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DDM 2909人血白蛋白标曲方法


⑥ 通过密度计测试常规样品的测试结果


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DDM-2909人血白蛋白方法样品测试结果


结论:

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折光法/密度法均可简单、准确、快速的用于蛋白生产制备的中间品和终产品的蛋白含量指标,可以指导生产及浓缩,提纯等过程。


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